硅膠基質(zhì)液相色譜柱檢測的對象是高沸點(diǎn)、難氣化的大分子化合物，其具有、快速、靈敏的特點(diǎn)，在生物醫(yī)藥研究、檢測方面有較多的應(yīng)用。然而，在使用硅膠基質(zhì)液相色譜柱檢測生物醫(yī)藥上的樣品時(shí)，由于行業(yè)特性，樣品中的蛋白質(zhì)殘留，時(shí)常會對液相色譜柱造成污染。本文主要介紹液相色譜硅膠鍵合反相柱上的蛋白質(zhì)殘余清洗方法。
在檢測生物物質(zhì)如血漿或血清等積累在反相色譜柱上，必須采用不同與其他物質(zhì)的清洗方法。大部分情況下，純有機(jī)溶劑如乙晴或甲醇不溶解多肽和蛋白質(zhì)，因此不能有效地清洗柱子。反而，有機(jī)溶劑和緩沖液、酸、離子對試劑等的混合物則能有效地溶解。為確保液相色譜柱再生的效果，建議在使用溶劑沖洗色譜柱之前，了解色譜柱的填料類型以及確保使用的溶劑能與柱子的填料相容。硅膠基質(zhì)的柱子通常來說都是相容的，但有機(jī)聚合物基質(zhì)的柱子可能會在某些溶劑組合中膨脹或收縮，這樣會影響色譜柱的柱效。
在使用溶劑清洗反相色譜柱時(shí)，須對每個(gè)溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20體積。由于有些溶劑系統(tǒng)黏性很大，沖洗的流速應(yīng)該相應(yīng)調(diào)整以確保不會超過泵壓。當(dāng)檢測的是尿液等樣品溶液時(shí)，至少應(yīng)該用40～50體積的HPLC級水來沖洗柱子。
對于反相柱子，不建議用表面活性劑如十二烷基磺酸鈉（SDS）和三硝基甲苯，因?yàn)檫@些化合物必然會牢固吸附在硅膠鍵合相柱子上很難除去。用表面活性劑會影響裝填表面而改變其性質(zhì)。然而有一個(gè)分離小組的研究表明由某個(gè)小組做的污染后的柱子可以用500μL1％SDS溶液用1ml/min的流速清除下多肽合成產(chǎn)物。如果繼續(xù)用從5%～95%含1%三氟乙酸的乙晴梯度洗脫，可以恢復(fù)多肽的分離。
微信公眾號
訪問手機(jī)端
